改良原代培养方法提高人胎盘绒毛膜间充质干细胞的产量

摘要：

目的 建立获得大量P0代人胎盘绒毛膜间充质于细胞(hpcMSCs)培养方法.方法 从胎盘绒毛膜分离出hpcMSCs,经初次培养和再次培养7d后,将原培养瓶中培养基、未贴壁组织和冲洗生理盐水离心后分别进行再次培养和第3次培养.用倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8测定细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面标记,成脂、成骨诱导分化试剂盒鉴定细胞的分化潜能.结果 获得的hpcMSCs均为成纤维细胞样贴壁细胞,每例胎盘获得(25.54±3.38)×106个P0代细胞,初次培养、再次培养和第3次培养获得的细胞数分别为(11.73±2.09)×106、(11.12±1.42)×106和(2.69±0.71)×106,培养时间分别为(12.00±0.64)d、(8.87±0.63)d和(12.33±0.80)d.再次培养时间和获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养的时间差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有时间延迟的趋势.3次培养的每培养瓶获得细胞数分别为(1.12±0.15)×106、(2.10±0.16)×106和(1.04±0.16)×106,再次培养获得细胞数同初次培养、第3次培养差异均有统计学意义(均P＜0.05),初次培养和第3次培养获得细胞数差异无统计学意义(P＞0.05),但第3次培养有细胞数量减少的趋势.3次培养的细胞生长曲线和表面标记的表达率无差异,成骨、成脂诱导分化检测均呈阳性.结论 一份绒毛膜标本,通过3次培养,获得的P0代hpcMSCs细胞数量比初次培养翻倍,本方法可为再生医学提供足够的种子细胞.

关键词：间充质干细胞、绒毛膜、细胞培养

所属期刊栏目：40

分类号：R72;R55

资助基金：National Natural Science Foundation of China81100244;Medical Research Foundation of Guangdong ProvinceB2010274;Science and Technology Project of Guangdong Province2014A020212027;Fund of Guangzhou Institute of Pediatrics/Guangzhou Women and Children's Medical Center YIP-2016-014国家自然科学基金81102248;广东省医学科研基金B2010274;广东省科技计划项目2014A020212027;广州市妇女儿童医疗中心儿科研究所基金YIP-2016-014

在线出版日期：2017-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：183-187,后插4