着丝粒相关蛋白E的抗体制备

摘要：

目的 制备着丝粒相关蛋白E(CENP-E)的兔源特异性多克隆抗体.方法 应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pHis-CENPEC410,并将其转化至表达菌株BL-21 (DE3)感受态细胞中;然后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-CENPEC410融合蛋白,再用Ni-NTA镍离子金属螯合树脂柱亲和层析法进行纯化;最后将纯化后的蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性CENP-E多克隆抗体,分别用免疫印迹法和免疫共沉淀法对免疫抗体血清进行检测,用免疫荧光染色法检测纯化的抗体.结果 制备的抗体血清可较好地应用于免疫印迹和免疫共沉淀实验,纯化的抗体可用于免疫荧光染色.结论 获得了具有较高特异性和灵敏度的CENP-E多克隆抗体,为后续CENP-E蛋白的研究奠定了基础.

关键词：着丝粒相关蛋白E、多克隆抗体、有丝分裂

所属期刊栏目：39

分类号：R735.7;R392.11;S852.65

在线出版日期：2016-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：74-78,后插2