一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化

摘要：

目的 利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体.方法 采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10％～30％和10％～45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体;然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心;再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1.5 ml离心管中,测量每一个样品的吸光度值A260并提取其中的蛋白质,利用Western Blot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位.结果 核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上.结论 利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体.该法分离效果好,操作简单,为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法.

关键词：连续蔗糖密度梯度、核糖体、核糖体前体、RPL15

所属期刊栏目：38

分类号：Q7(分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金;新世纪优秀人才支持计划;天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目;国家自然科学基金;天津师范大学中青年教授学术创新推进计划;天津师范大学校级项目;天津师范大学渤海学者基金项目;天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目;天津市中小企业科技创新基金

在线出版日期：2016-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：262-265,281