10.3760/cma.j.issn.1673-4181.2014.01.005
染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定
目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA(shRNA)表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株(SGC-shKIF4A)和稳定表达无意义shRNA的对照细胞(SGC-shNC);同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.
KIF4A、有丝分裂、纺锤体中央区、小分子干扰RNA、胃癌细胞
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Q78;R735(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金;国家自然科学基金;新世纪优秀人才支持计划;国家自然科学基金;天津师范大学中青年教授学术创新推进计划;天津师范大学校级博士基金;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金
2014-04-15(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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