GST-NLS(ING1)融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究

摘要：

目的构建P33ING1b核定位信号肽(NLS)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白(GST-NLS)原核表达载体及建立GST-NLS纯化技术.方法先用RT-PCR从ING1基因中扩增编码NLS的cDNA片段,将其插入克隆质粒pbluescript-SK,再以克隆质粒NLS片段为模板,PCR扩增NLS cDNA片段,并加入限制性酶切位点和终止子,进而将其插入原核表达质粒pGEX-5X-3,构建GST-NLS原核表达载体pGEX-5X-3-NLS,最后用IPTG诱导其在大肠杆菌(BL21)中表达,用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-NLS.结果酶切鉴定和测序分析显示,NLS cDNA片段被成功插入pbluescript-SK多克隆位点;NLS cDNA片段在pGEX-5X-3-NLS中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确,NLScDNA序列位于表达载体的GST序列下游,插入片段全长183 bp.经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和亲和纯化,从负荷pGEX-5X-3-NLS质粒的BL21菌株中获得了31.57 ku的GST-NLS.结论成功建立了重组GST-NLS的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法学,为进一步研究p33ING1b入核运载机制提供了重要技术手段.

关键词：生长抑制因子-1、基因重组、pGEX-5X-3表达载体、融合蛋白

所属期刊栏目：29

分类号：R318;Q78(医用一般科学)

资助基金：天津市高等学校科技发展基金32004ZD06

在线出版日期：2006-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：69-72,80