七氟醚通过抑制细胞焦亡减轻蛛网膜下腔出血后早期脑损伤

摘要：

目的:探讨七氟醚通过炎症类受体蛋白-3（Nod-like receptor associated protein 3, NLRP3）介导的细胞焦亡途径对蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage, SAH）后早期脑损伤（early brain injury, EBI）的影响。方法:108只10~12周雄性C57BL/6小鼠，按随机数字表法分为3组（每组36只），假手术组（A组）、模型组（B组）和模型+七氟醚组（C组）。B组和C组采用线穿法制作SAH模型，A组做相同的手术，但不刺破大脑中动脉。C组于SAH模型建立后1 h，持续吸入3%七氟醚和空气1 h。各组小鼠进行SAH分级和神经功能评分，测定脑水含量，伊文思蓝（evans blue, EB）染色法计算EB渗出量评判小鼠血脑屏障通透性；Western blot法检测与血脑屏障通透性密切相关的基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotein 9, MMP-9）和紧密连接蛋白[闭合小环蛋白-1（zonula occludens-1, ZO-1）、咬合蛋白（occludin）、靠停蛋白-5（claudin-5）]及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC）、裂解半胱氨酸蛋白酶（caspase-1）、IL-18、IL-1β的表达；实时荧光定量PCR检测NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA的表达水平；caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1的活性；TUNEL和NeuN双重染色检测神经细胞焦亡情况。结果:SAH分级和神经功能评分显示：与A组比较，B组的SAH分级明显增高（
P<0.05）；与B组比较，C组SAH分级明显降低（
P<0.05）；与C组比较，B组的神经系统评分明显降低（
P<0.05）。脑水含量及EB渗出量检测显示：与A组比较，B组的脑含水量与EB渗出量明显增加（
P<0.05）；与B组比较，C组的脑含水量与EB渗出量明显减少（
P<0.05）。Western blot检测结果显示：与A组比较，B组中ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达水平明显降低（
P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显增高（
P<0.05）；与B组比较，C组中ZO-1、occludin和claudin-5表达水平明显增高（
P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平明显降低（
P<0.05）；与A组比较，B组中MMP-9表达水平明显增高；与B组比较，C组中MMP-9表达水平明显降低（
P<0.05）。实时荧光定量PCR实验显示：与A组比较，B组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显增加；与B组比较，C组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显降低（
P<0.05）。与A组比较，B组的caspase-1活性明显增加；与B组比较，C组的caspase-1的活性明显减少（
P<0.05）。TUNEL染色检测显示：与A组比较，B组的TUNEL阳性神经元细胞数量明显升高（
P<0.05）；与B组比较，C组TUNEL神经元细胞阳性数量明显降低（
P<0.05）。
结论:七氟醚能够抑制SAH后NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡，改善SAH后的EBI情况。

关键词：七氟醚、蛛网膜下腔出血、脑损伤、炎症类受体蛋白-3、焦亡

所属期刊栏目：43

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1128-1135