微RNA-377-3p靶向X染色体连锁的凋亡抑制蛋白调控缺氧/复氧导致的肾细胞损伤

摘要：

目的:探讨微RNA-377-3p（microRNA-377-3p, miR-377-3p）对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）人肾近端肾小管上皮细胞（human renal tubule epithelial cell line, HK-2）损伤的影响及机制。方法:HK-2先置于三气低氧培养箱（1%O
2、5%CO
2、94%N
2）中培养12 h，诱导细胞缺氧损伤。之后细胞置于常氧培养箱（5%CO
2、95%空气）培养，建立HK-2 H/R模型。构建miR-377-3p抑制剂（inhibitor）、miR-377-3p拟似物（mimic）、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis, XIAP）特异性小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）（si-XIAP）及相应的对照物转染细胞。按照随机数字表法将细胞分为7组（每组5×10
5个细胞），即正常常氧组（NC组）、缺氧/复氧组（H/R组）、miR-377-3p抑制剂对照组（miR-IC组）、miR-377-3p抑制剂组（miR-I组）、miR-377-3p拟似物对照组（miR-MC组）、miR-377-3p拟似物组（miR-M组）、miR-377-3p抑制剂特异性小干扰RNA组（miR-XIAP组）。采用RT-PCR实验检测细胞中miR-377-3p表达量，细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK8）检测细胞存活率，ELISA实验检测炎症因子IL-6及TNF-α表达水平。生物信息学软件预测miR-377-3p靶基因，荧光素酶报告基因实验检测miR-377-3p对XIAP信使RNA（messenger RNA, mRNA）3′端非翻译区（untranslated region, UTR）荧光素酶活性的变化。CCK8及ELISA实验检测细胞经miR-377-3p抑制剂特异性小干扰RNA处理后细胞存活率及炎症因子变化。
结果:成功建立HK-2 H/R模型。与NC组比较，miR-377-3p表达水平在H/R组明显升高（
P<0.05）；与H/R组比较，miR-I组miR-377-3p表达水平明显降低，miR-M组miR-377-3p表达水平明显升高（
P均<0.05）。与NC组比较，H/R组细胞存活率明显降低、IL-6及TNF-α表达升高（
P均<0.05）；与H/R组比较，miR-I组细胞存活率增高且IL-6及TNF-α表达水平降低，miR-M组细胞存活率下降、IL-6及TNF-α表达水平增加（
P均<0.05）。生物信息学方法提示XIAP为miR-377-3p靶基因，miR-377-3p降低XIAP的表达并且抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性（
P均<0.05）。此外，CCK8及ELISA结果提示，敲减XIAP可逆转miR-377-3p抑制剂导致的细胞存活率增强及IL-6和TNF-α表达下降（
P均<0.05）。
结论:抑制miR-377-3p可减轻H/R诱导的HK-2损伤，其机制与负性调控XIAP有关。

关键词：缺氧/复氧、人肾近端肾小管上皮细胞、微RNA-377-3p、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白

所属期刊栏目：42

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：673-678