白细胞介素-1受体相关激酶M抑制p22phox调控脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发

摘要：

目的 研究白细胞介素-1受体相关激酶M(interleukin-1 receptor-associated kinase M, IRAK-M)是否调控p22phox介导脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的巨噬细胞呼吸爆发. 方法 分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞,细胞贴壁后分为内毒素耐受(endotoxin tolerance, ET)组和对照组(NC组). ET组预先10 μg/L LPS刺激2 h后,予100 μg/L LPS再刺激,NC组不作预先处理,直接100 μg/L LPS刺激,3 h后收集上清液,ELISA法检测TNF-α和IL-6水平,试剂盒检测过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2-)水平;细胞裂解后提取蛋白,Western blot法检测IRAK-M和p22phox蛋白表达.采用IRAK-M 小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰IRAK-M,分组为:LPS刺激组(NC-control组)、干扰IRAK-M+LPS刺激组(NC-si-IRAK-M组)、内毒素耐受组(ET-control组)和干扰IRAK-M+内毒素耐受组(ET-si-IRAK-M组),PCR检测干扰效率并再次检测IRAK-M和p22phox的蛋白表达.IRAK-M干扰成功后,分组为:二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)+内毒素耐受组(control-placebo组)、夹竹桃麻素(apocynin)+内毒素耐受组(control-apocynin组)、DMSO+干扰IRAK-M+内毒素耐受组(si-IRAK-M-placebo组)和干扰IRAK-M+apocynin+内毒素耐受组(si-IRAK-M-apocynin组),采用apocynin抑制p22phox,再次取上清液检测TNF-α、IL-6以及H2O2、O2-水平. 结果 与NC组比较,ET组TNF-α、IL-6水平和H2O2、O2-水平均降低,p22phox表达水平降低,而IRAK-M表达水平升高(P<0.05);干扰IRAK-M后,与ET-control组比较,ET-si-IRAK-M组蛋白水平明显降低,p22phox的蛋白水平明显升高(P<0.05);干扰IRAK-M并抑制p22phox后,与si-IRAK-M-placebo组比较,si-IRAK-M-apocynin组TNF-α、IL-6和H2O2、O2-的水平明显降低(P<0.05). 结论 IRAK-M通过抑制p22phox对内毒素诱导的小鼠巨噬细胞呼吸爆发产生负向调控作用.

关键词：白细胞介素-1受体相关激酶M、p22phox、免疫抑制、巨噬细胞、呼吸爆发、氧化应激、脓毒症

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资助基金：国家自然科学基金面上项目81671887, 81772105, 81701062;上海市优秀青年医学人才培养计划2017YQ015 Fund program: National Natural Science Foundation of China General Program81671887, 81772105, 81701062;Shanghai Outstanding Youth Medical Professionals Training Program2017YQ015

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：420-425