氯胺酮通过抑制蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导B103细胞自噬产生抗帕金森病的作用及分子机制

摘要：

目的 探讨氯胺酮通过诱导B103细胞自噬产生抗帕金森病(Parkinson's disease,PD)的作用及分子机制.方法 以B103细胞为实验模型,分别以不同浓度氯胺酮(0、100、200、400μmol/L)及400μmol/L氯胺酮+5 mmol/L 3-methyladenine(3-MA)处理后,采用噻唑蓝[3-(4,5-dimenthyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)]染色法检测细胞增殖率;应用吖啶橙与Lyso-Tracker Red染色,荧光显微镜检测细胞自噬;Western blot检测相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(microtubulesas sociated protein light,LC3)、 蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p70S6K、 雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、α-synuclein(α-syn)及β-synuclein(β-syn)蛋白的表达.结果 不同浓度氯胺酮作用于神经母细胞瘤B103细胞7 d后,MTT染色法检测结果显示,100、200、400μmol/L分别与0μmol/L比较,细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05);吖啶橙与Lyso-Tracker Red染色结果提示,随着氯胺酮浓度增加,自噬作用逐渐增强(P<0.05);Western blot结果显示,400μmol/L较0μmol/L自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、磷酸化(phospho,p)-Akt、p-p70S6K以及p-mTOR表达减少,LC3-Ⅱ、Beclin-1表达增多(P<0.05);此外,400μmol/L较0μmol/L表达PD标志性蛋白α-syn减少而β-syn增多(P<0.05).自噬抑制剂(3-MA,5 mmol/L)预处理可逆转氯胺酮对B103细胞的上述作用(400μmol/L+3-MA与400μmol/L比较,P<0.05).结论 氯胺酮通过抑制Akt/mTOR信号转导通路诱导B103细胞自噬并降解α-syn从而产生抗PD的作用.

关键词：氯胺酮、帕金森病、自噬、蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号转导通路

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在线出版日期：2018-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：390-394