microRNA-93靶向调控Rho相关激酶2/LIMK/Cofilin通路影响骨癌痛小鼠痛行为

摘要：

目的 观察microRNA-93(miR-93)及Rho相关激酶(rho associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)通路对小鼠骨癌痛(bone cancer pain,BCP)行为的影响并探讨其潜在机制.方法 将C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组)、假手术组(Sham组)及BCP组、BCP+PBS组、BCP+Y-27632(ROCK抑制剂)组,每组13只.建模前1d及建模后3、5、7、10、14 d进行动物痛行为学评估,观察小鼠对机械和热刺激的反应.建模后第14天处死小鼠,取术侧L4～L6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),SYBR Green实时荧光定量PCR法观察miR-93表达变化,双荧光素酶实验检测miR-93对ROCK2基因的靶向调控.Western blot法观察ROCK2、LIMK(LIM domain kinase,LIMK)和Cofilin蛋白在DRG神经元中表达.结果 C57BU6J小鼠股骨接种NCTC2472细胞后,患侧后肢分别在第5、7天开始出现明显的触诱发痛[Sham组(6.81±1.04)g,BCP组(5.12±0.47)g]和热痛过敏[Sham组(11.75±1.46)s,BCP组(7.61±1.07)s],并呈进行性加重(P＜0.05);BCP组小鼠miR-93表达随疼痛加重呈时间依赖性降低,而ROCK2表达呈时间依赖性增加(P＜0.05),进而激活LIMK/Cofilin通路.双荧光素酶实验证实miR-93可与ROCK2 mRNA 3'-UTR直接结合,从而发挥对ROCK2转录后翻译的抑制作用(P＜0.05).鞘内注射ROCK抑制剂能有效缓解小鼠触诱发痛[BCP+PBS组(3.43±0.89)g,BCP+Y-27632组(5.74±1.02)g]和热痛过敏[BCP+PBS组(5.48±1.03)s,BCP+Y-27632组(9.82±1.24)s],同时抑制通路主要因子ROCK2、磷酸化-LIMK (phospho-LIMK,p-LIMK)、磷酸化-Cofilin (phospho-Cofilin,p-Cofilin)的表达(P＜0.05).结论 小鼠BCP疼痛过程中miR-93表达降低,进而激活ROCK2/LIMK/Cofilin通路,鞘内注射ROCK抑制剂可抑制该通路的活化,缓解小鼠BCP症状.

关键词：骨癌痛、镇痛、microRNA-93、Rho相关激酶2/LIMK/Cofilin通路

所属期刊栏目：38

分类号：R44;R33

在线出版日期：2017-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：688-694