筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1表达的小干扰RNA及其毒性检测

摘要：

目的 筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1(Caveolin-1)表达的小干扰RNA(small interferenceRNA,siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性. 方法 设计合成针对Caveolin-1的siRNA 3条(siRNA422,siRNA548,siRNA710)及1条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA.在siRNAFect介导下转染血管内皮细胞.用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定转染后血管内皮细胞中Caveolin-1 mRNA的表达,Western blot方法测定干扰后Caveolin-1蛋白表达,比较抑制率,筛选出有效抑制Caveolin-1表达的siRNA.采用磺基罗丹明B法(sulforhodamineB,SRB)分析转染复合物的细胞毒性. 结果 ①在siRNAFect相同剂量下,siRNA 20、30 nmol/L组或40 nmol/L组转染效率均达到85％以上(P＜0.01)；②siRNAFect 1.3μl复合10 nmol/L或20 nmol/L siRNA组细胞存活率均达到80％以上(P＜0.05)；③siRNA548对EA.hy926细胞Caveolin-1基因mRNA抑制效果最明显(P＜0.01)；④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比较,siRNA548干扰血管内皮细胞48 h后,Caveolin-1蛋白的表达量最低(P＜0.01). 结论 ①siRNA548对血管内皮细胞Caveolin-1表达的抑制效果最大.②siRNA浓度20 nmol/L复合siRNAFect 1.3μl转染效率高,细胞毒性低,适合转染.

关键词：血管内皮细胞、小窝蛋白-1、小干扰RNA、磺基罗丹明B法、细胞毒性、筛选

所属期刊栏目：34

分类号：R73;R394.2;R541.4

资助基金：江苏省医学重点人才项目SYS201111

在线出版日期：2013-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：595-599