抑制小鼠低氧诱导因子-1α基因的小干扰RNA腺病毒载体的构建和功能鉴定

摘要：

目的 构建针对小鼠低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible transcription factor-1α,HIF-1α)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)腺病毒载体AdHIF-1α-shRNA-EGFP,鉴定AdHIF-1α-shRNA -EGFP在培养的小鼠胚胎神经干细胞中对HIF-1α表达的影响,为研究HIF-1α信号途径在神经干细胞生物学中的作用提供基础.方法 采用生物信息学方法设计合成针对HIF-1α的siRNA靶DNA序列,通过DNA重组技术构建小鼠HIF-1 α-shRNA-EGFP腺病毒载体,PCR和测序鉴定.体外转染培养的小鼠前脑皮质神经干细胞,流式细胞仪检测转染效率,对AdHIF-1 α-shRNA-EGFP转染的细胞进行低氧处理,双重免疫荧光检测小鼠胚胎神经于细胞中HIF-1α表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot定量H1F-1α基因和蛋白水平.结果 所克隆的序列和已知序列一致；AdHIF-1α-shRNA -EGFP可高效转染小鼠前脑皮质神经干细胞；RT-PCR和Western blot结果显示,AdHIF-1α-shRNA -EGFP转染小鼠前脑皮质神经干细胞后,低氧条件下小鼠前脑皮质神经干细胞中HIF-1α的基因和蛋白表达分别降低52.05％和67.27％.结论 构建的AdHIF-1 α-shRNA-EGFP能够成功抑制低氧条件下小鼠前脑皮质神经干细胞中HIF-1 α的表达.

关键词：神经干细胞、小鼠、低氧诱导因子-1α、小干扰RNA、腺病毒载体

所属期刊栏目：32

分类号：R614(外科手术学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30772081;81071071;教育部"新世纪优秀人才支持计划"NECT-08-0436;高等学校博士学科点专项科研基金20100201110051

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：642-646