水溶性纳米凝脂聚合物运载siRNA沉默PC12细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体1基因的实验研究

摘要：

目的 探讨离体条件下水溶性纳米凝脂聚合物(water-soluble lipopolymer,WSLP)运载小干涉RNA(small interference RNA,siRNA)沉默N-甲基-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)基因的可行性,为在体条件下研究WSLP运载siRNA沉默NMDAR1治疗慢性疼痛等疾病打下基础.方法 先合成WSLP并与NMDAR1 siRNA连接成WSLP/siRNA复合物,观察其在血清中的稳定性及其对PC12细胞的毒性；然后将PC12细胞通过随机数字表法分为阴性转染组(单纯siRNA转染PC12细胞)、对照转染组(WSLP/乱序siRNA复合物转染PC12细胞)及WSLP转染组(WSLP/siRNA转染PC12细胞),通过实时-聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(western-blot)检测各组NMDAR1转录水平及蛋白水平基因表达的变化.结果 WSLP/NMDAR1/siRNA在血清中的稳定性高,对PC12细胞几乎无毒性.与阴性转染组(0.69±0.18、4.36±1.02)相比,WSLP转染组(0.35±0.21、1.96±0.48)转录水平NMDAR1的基因表达降低50％,蛋白表达水平降低55％,差异均有统计学意义(P＜0.01),阴性转染组和对照转染组(0.640.13、4.32±1.09)之间的基因表达水平差异无统计学意义.结论 离体条件下WSLP可有效运载siRNA沉默NMDAR1基因的表达.

关键词：NMDA受体1、水溶性凝脂聚合物、小干涉RNA

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分类号：R651.2(外科学各论)

资助基金：广东省自然科学基金面上项目07000059;广州市科技计划项目2010Y1-C301;广东省科技计划项目2010B031600123

在线出版日期：2012-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：554-557