人转铁蛋白纯化制备及其抗原活性验证

摘要：

目的 采用非亲和纯化方法从人血清中制备获得高纯度转铁蛋白(T RF),并用此为免疫抗原免疫新西兰大白兔,验证T RF蛋白的免疫原性.方法 首先采用两步硫酸铵沉淀法从血清中粗纯 T RF蛋白,再用两步阴离子交换层析柱进行纯化,最终得到 TRF.结果 TRF蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)纯度与外购纯品相当,且高效液相色谱(HPLC)纯度达到96.8%,纯化回收率为78.6%.对于同一批TRF样品, T RF检测试剂盒(免疫法)测得的活性浓度与紫外分光光度计法测得的蛋白浓度比值(Rc)约为0.95,说明制备的T RF与免疫检测试剂盒中的T RF抗体具有良好的抗原反应性.最后用纯化样品免疫新西兰大白兔,经过4次免疫后的抗血清效价滴度达到1:128000,说明制备的 T RF具有良好的免疫原性.结论 制备的高纯度T RF具有良好的抗原反应性及免疫原性,可用于动物免疫以制备抗T RF抗体,为配制T RF检测试剂(免疫法)提供良好的原料基础.

关键词：转铁蛋白、硫酸铵沉淀法、阴离子交换层析、抗原反应性、免疫原性

所属期刊栏目：39

分类号：R977.6(药品)

资助基金：宁波市生命健康重大项目2017C110014

在线出版日期：2018-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：779-783