嗜麦芽窄食单胞菌产氨基糖苷类修饰酶基因 APH（3′′）-Ⅰ和A AC（2′）-Ⅰ的克隆与表达

摘要：

目的：对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch810（SM gzch810）携带的产氨基糖苷类修饰酶基因 APH（3′′）‐Ⅰ和AAC（2′）‐Ⅰ进行扩增、测序及原核表达，为下一步功能试验的开展提供基础材料。方法提取SM gzch810基因组染色体，PCR扩增APH（3′′）‐Ⅰ和AAC（2′）‐Ⅰ全基因并克隆入pMD18‐T载体进行核苷酸序列分析；将APH（3′′）‐Ⅰ和AAC（2′）‐Ⅰ基因克隆至表达载体pGEX‐4T‐1，转化大肠杆菌BL21，SDS‐PAGE分析融合蛋白表达情况。结果以染色体DNA为模板，成功扩增800 bp APH（3′′）‐Ⅰ基因和550 bp AAC（2′）‐Ⅰ基因；序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性分别达91％及95％；SM gzch810 APH（3′′）‐Ⅰ和AAC（2′）‐Ⅰ序列已登录GenBank（登录号：HQ315852和 HQ315853）；SDS‐PAGE显示，融合基因表达的蛋白相对分子质量分别约为56×103和46×103。结论从SM gzch810中成功克隆及表达了APH （3′′）‐Ⅰ和AAC （2′）‐Ⅰ基因，为下一步检测上述两种重组体大肠杆菌对相应抗菌药物的耐药性及其功能评价做好准备。

关键词：嗜麦芽窄食单胞菌、产氨基糖苷类修饰酶基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：37

分类号：R96;S85

在线出版日期：2016-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2099-2101