ICAT 干扰慢病毒表达载体构建及稳转 HL60细胞株的建立

摘要：

目的：构建ICAT基因的干扰慢病毒表达载体，建立稳定转染的 HL60细胞系。方法人工设计、合成针对ICAT基因干扰序列，退火后连接到PGLV3干扰载体上，与PG‐p1‐VSVG、PG‐p1‐REV、PG‐p1‐RRE共转染293T细胞，包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度，感染HL60细胞，建立稳定细胞株；应用RT‐PCR和Western Blot技术检测 HL60稳定细胞中ICAT 基因和蛋白表达情况，并与对照组进行比较。结果成功构建了针对ICAT 基因的RNAi慢病毒表达载体，病毒滴度为2×108 TU／mL ；建立稳定转染的HL60细胞株。有效干扰验证显示，shICAT能明显降低ICAT的mRNA及蛋白水平（P＜0．001）。结论成功构建ICAT基因的shRNA慢病毒表达载体，建立稳定干扰ICAT表达的HL60细胞株。

关键词：ICAT基因、RNA干扰、HL60细胞

所属期刊栏目：37

分类号：TN9;R37

资助基金：国家自然科学基金资助项目81301492。

在线出版日期：2016-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：875-877