LA MP结合示差脉冲伏安法快速检测肺炎克雷伯菌的方法建立及临床应用

摘要：

目的：利用环介导恒温扩增（LAMP）技术结合示差脉冲伏安（DPV）法，建立快速检测肺炎克雷伯菌的方法，并将其应用于小儿腹泻病原菌分析。方法通过基因比对与引物设计，建立针对肺炎克雷伯菌的LAMP 检测方法。采用LAMP 技术对肺炎克雷伯菌和其他8种干扰菌以及对不同浓度肺炎克雷伯菌进行扩增，结合DPV法评价其特异性及灵敏度。将200份腹泻患儿的粪便标本同时采用LAMP方法与培养法进行检验，对比2种方法检测肺炎克雷伯菌的阳性率。统计近2年该院门诊及住院小儿腹泻病例，初步分析其常见腹泻致病菌种类及比例。结果设计出针对肺炎克雷伯菌的LAMP 检测方法，该法只针对肺炎克雷伯菌有扩增，对其他干扰菌不扩增，显示出良好的特异性，LAMP法最低检测限为10 CFU/mL，显示出较高的灵敏度。200份腹泻患儿粪便标本，采用LAMP法与培养鉴定法检测的肺炎克雷伯菌阳性率差异无统计学意义（P＞0．05）。近2年内该院小儿腹泻粪便标本中共检出致病菌709株，主要病原菌分别为志贺菌（34．23％）、大肠杆菌（15．40％）、铜绿假单胞菌（12．96％）、弗劳地枸橼酸杆菌（7．82％）、沙门菌（6．36％）、白色念珠菌（6．11％）、肺炎克雷伯菌（4．40％）、产气荚膜梭菌（3．67％）、变形杆菌（3．42％）、其他菌（5．63％）。结论设计出了针对肺炎克雷伯菌的LAMP检测方法，该法具有良好的特异性和较高的灵敏度，能够用于肺炎克雷伯菌的快速检验。

关键词：环介导恒温扩增、示差脉冲伏安法、肺炎克雷伯菌、快速检验、细菌性肠炎

分类号：R96;R91

资助基金：重庆市科技攻关重点项目CSTC2011AB5035。

在线出版日期：2014-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1539-1541