华支睾吸虫表膜蛋白TP31．8的克隆、表达及免疫活性

摘要：

目的：从华支睾吸虫cDNA文库扩增表膜蛋白31．8 kDa（TP31．8）基因，克隆入表达载体pGEX-4T-1，诱导表达重组蛋白，纯化重组蛋白免疫大鼠获得特异性抗体，为后续功能研究奠定基础。方法以华支睾吸虫cDNA文库为模板，设计一对特异性引物，扩增华支睾吸虫TP31．8基因，扩增产物经犈犮狅犚Ⅰ、犡犺狅Ⅰ双酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接，转化大肠杆菌BL21，提取质粒进行双酶切鉴定，IPTG诱导重组蛋白表达，并对基因进行测序及比对分析。融合蛋白经谷胱甘肽 Sepharose 4B柱纯化后，用凝血酶去除谷脱甘肽疏基转移酶（GST ）。获得纯化的重组蛋白，使用重组蛋白皮下注射免疫大鼠，ELISA 检测抗TP31．8的特异性IgG抗体滴度。结果 TP31．8基因成功扩增，重组 pGEX-4T-1-TP31．8双酶切鉴定可见目的片段。测序结果显示TP31．8在正确阅读框中，TP31．8开放阅读框长828 bp，编码相对分子质量为31．8×103的蛋白，等电点为4．7。TP31．8与其他蠕虫的表膜蛋白具同源性，与日本血吸虫表膜蛋白Sm20的一致性为41％，IPTG 诱导后，pGEX-4T-1-TP31．8/BL21有相对分子质量57．8×103融合蛋白的表达。融合蛋白经凝血酶酶切后得到相对分子质量31．8×103的重组蛋白。使用重组蛋白免疫大鼠，ELISA检测抗重组蛋白的特异的IgG抗体滴度为1∶25600。结论成功克隆了华支睾吸虫表膜蛋白TP31．8基因，并获得重组蛋白的表达。重组TP31．8具免疫原性，免疫大鼠获得的特异性抗体滴度为1∶25600，为其后续功能研究奠定了基础。

关键词：华支睾吸虫、重组蛋白质类、克隆、生物

分类号：R38;R57

资助基金：国家自然科学基金资助项目30671831；国家高技术研究发展计划“863”计划资助项目2006AA02Z422。

在线出版日期：2014-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：129-131,133