氯喹通过调节自噬在EGFR-TKI耐药肺癌细胞系中的机制研究

摘要：

目的 探讨氯喹干预表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)肺癌耐药细胞系的作用机制.方法 选取EGFR-TKI耐药的3种细胞系A549、H1960、H1975及EGFR-TKI敏感的细胞系PC9,采用Cell Counting Kit-8 (CCK8)法检测4种细胞系的生长活性,免疫蛋白印迹(Western blot)检测各细胞自噬蛋白表达量及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性.采用EGFR-TKI特罗凯及自噬溶酶体抑制剂氯喹干预细胞生长,观察细胞活性及自噬表达变化.结果 Westernblot检测4种细胞系磷酸化的S6蛋白表达阳性;伴有EGFR-TKI耐药的A549、H1650、H1975细胞内自噬蛋白P62相对表达量减少,EGFR TKI敏感的肺癌细胞PC9中P62的相对表达量增多.CCK8法检测表明特罗凯可明显抑制PC9细胞的生长活性,对A549、H1650、H1975细胞系的生长则无明显抑制作用;进一步采用mTOR抑制剂Torin2作用于肺癌细胞,发现Torin2对PC9的生长抑制作用较明显,对其他3种细胞的生长无明显抑制作用.采用氯喹作用于肺癌4种细胞系,Western blot检测其未显著改变磷酸化S6蛋白的相对表达量,但显著抑制4种细胞系的生长活性,并以PC9与A549的抑制作用尤为明显.CCK8法检测表明氯喹与特罗凯的联合作用明显抑制PC9、A549和H1975的增殖,但对H1650的生长抑制作用较弱.结论 EGFR-TKI耐药细胞系中存在mTOR活化并伴自噬表达增强,但采用Torin2未改变自噬表达及肺癌细胞生长活性.氯喹能明显抑制EGFR-TKI肺癌耐药细胞系的生长活性,氯喹联合EGRI-TKI能协同抑制细胞生长,自噬抑制剂联合EGFR-TKI可作为未来克服EGFR-TKI耐药的治疗方案之一.

关键词：表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂、自噬、非小细胞肺癌、耐药性

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资助基金：福建省卫生计生委青年科研课题2014-2-65;福建省自然科学基金2015J01551Youth Research Project of Fujian Province Health and Family Planning2014-2-65;Natural Science Foundation of Fujian Province2015J01551

在线出版日期：2018-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1361-1366