沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定

摘要：

目的 利用重组BCG (rBCG)技术,构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Der p2和Omp D抗原的两种rBCG 口服疫苗.方法 经PCR法分别扩增获得Der p2和Omp D基因,测序正确后将两者克隆入原核表达载体pProEX HTb,获得pProEX HTb Der p2-Omp D质粒.①串联表达:将Der p2-Omp D融合基因亚克隆入穿梭胞壁表达载体pCW,经酶切鉴定阳性命名为pCW Der p2-Omp D 质粒.将此重组质粒电穿导入BCG感受态细胞,构建可胞壁串联表达Der p2-Omp D融合蛋白的rBCG；②并联表达:构建pCW-Der p2与pCW-Omp D两种质粒,并将二者同时电穿导入BCG感受态细胞,以构建胞壁并联表达Der p2和Omp D蛋白的rBCG.经潮霉素抗性筛选的阳性克隆,均采用以下三种方式进行鉴定:PCR特异性扩增目的基因片段；用兔抗Der p2多克隆抗体与兔抗Omp D多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定.结果 采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Der p2和Omp D蛋白的两种rBCG口服疫苗,并通过PCR、斑点免疫杂交法及间 接免疫荧光法分别进行鉴定.结论 两种rBCG 口服疫苗构建成功,为体外实验和临床应用提供基础.

关键词：Omp D、屋尘螨抗原Der p2、重组BCG、口服疫苗

所属期刊栏目：32

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30871114

在线出版日期：2012-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1457-1462,封3