绿色荧光蛋白基因转染示踪比格犬体内骨髓间充质干细胞分化

摘要：

目的运用绿色荧光蛋白（GFP）标记技术，观察骨组织工程中种子细胞的变化和转归。方法使用重组腺病毒（Ad-GFP）将 GFP 基因转染比格犬骨髓间充质干细胞（BMSC），倒置相差显微镜下观察 BMSC 形态、碱性磷酸酶（ALP）和茜素红染色情况；荧光显微镜下观察细胞 GFP 表达状况。待细胞标记成功后将其离心，接种于β-磷酸三钙（β-TCP）上，回植于比格犬胫骨内侧骨膜囊内，构建组织工程骨记为 A 组；单纯β-TCP 植入对称胫骨内侧骨膜囊记为 B 组；单纯β-TCP 植入皮下记为 C 组。术后2周取材，分别行组织学观察、免疫组化检测，同时激光共聚焦显微镜下观察 GFP 表达情况。结果体外成骨诱导实验显示，ALP 染色以及茜素红染色阳性。组织学观察可见，A 组新生骨组织以及新生血管均较 B 组明显，C 组未见新生骨组织。免疫组化检测显示，A 组Ⅰ型胶原、血小板内皮细胞黏附分子 CD31染色阳性；B 组Ⅰ型胶原、CD31染色部分阳性；C 组未见阳性表达。免疫组化半定量检测显示，A、B 两组Ⅰ型胶原、CD31定量有统计学差异（P ＜0．05）。激光共聚焦显微镜观察结果显示，A 组新生骨组织内可见 GFP 表达，B、C 组未见 GFP 标记细胞。结论BMSC 是组织工程骨早期形成的重要来源，但周围成骨细胞并非新生骨组织主要来源；移植 BMSC 于骨膜下可促进新生血管形成。

关键词：骨组织工程、绿色荧光蛋白、骨髓间充质干细胞

所属期刊栏目：37

分类号：S51;S31

资助基金：国家自然科学基金81272132

在线出版日期：2016-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：117-122