人GINS2基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在上皮性卵巢癌中的表达

摘要：

目的 构建人GINS2基因RNA干扰慢病毒表达载体,并建立稳定干扰GINS2基因表达的上皮性卵巢癌细胞系,为研究GINS2蛋白在上皮性卵巢癌发生发展中的作用奠定基础.方法 针对GINS2基因序列,按照RNAi序列的设计原则,设计、合成GINS2基因特异性小分子干扰siRNA(small interference RNA,siRNA)靶点,与慢病毒构建重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获取正确克隆.将筛选出的最有效重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度.随后将其感染上皮性卵巢癌SKOV3细胞株细胞,采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率.结果 慢病毒RNA干扰载体经酶切和测序鉴定证实准确连接测序正确,且包装出来的病毒纯化后滴度达5×108 TU/mL.RT-qPCR、Western blot结果显示感染后GINS2 mRNA及蛋白水平显著下降.结论 成功构建了人GINS2基因特异性的慢病毒干扰载体,并获得了GINS2基因稳定干扰的上皮性卵巢癌SKOV3细胞系.

关键词：上皮性卵巢癌、GINS2、RNA干扰、慢病毒

所属期刊栏目：43

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：贵州省人民医院青年基金GZSYQN[2017]09号

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：679-682,封3