pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA真核表达干扰载体构建与鉴定

摘要：

目的 利用RNA干扰技术构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体,并在Hela细胞中鉴定.方法 针对目的基因人的CAPNS1基因(NM_001749),设计shRNA序列,以pYr-Lvsh为载体,构建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体;干扰载体转染Hela细胞,利用荧光定量PCR检测CAPNS1 mRNA表达情况;荧光分光光度检测calpain活性;Western-blot检测相关蛋白含量.结果 结果发现,载体酶切及测序结果显示pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体构建成功;qPCR显示与对照组相比,shRNA组CAPNS1表达受到抑制,CAPNS1-sh的干扰效率为50.30％;calpain活性检测显示shRNA组calpain活性下降并且CAPNS1、calpain1和calpain2蛋白含量下降.结论 结果表明pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA载体成功构建,并在Hela细胞中有效干扰CAPNS1表达.

关键词：CAPNS1、RNA干扰、pYr-Lvsh、载体构建

所属期刊栏目：43

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81673227,81172712;湖南省研究生创新科研项目CX2018B628

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：675-678