慢病毒及脂质体法转染原代软骨细胞的实验研究

摘要：

目的：利用慢病毒载体及Lipofectamine2000脂质体转染大鼠原代软骨细胞，探讨转染软骨细胞的理想条件。方法采用机械—酶消化法获取原代软骨细胞，经Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后，使用慢病毒载体介导GFP及利用Lipofectamine2000介导的FAM‐siRNA分别转染原代软骨细胞，倒置荧光显微镜检测转染效率，MTT法测定原代软骨的增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果采用脂质法转染软骨细胞不理想，转染率不到10％。运用慢病毒载体后转染率明显高于脂质体法，且随感染复数（病毒滴度×病毒液体积／细胞数，MOI）增加而增加，MOI为100时，转染率可达92．85％。MTT及流式结果显示，低MOI时，软骨细胞活力及凋亡率与对照组相比差异无统计学意义；当高MOI（200）时，细胞活力[（81．32±10．72）％]明显低于对照组，而细胞凋亡率[（21．37±2．80）％]明显高于对照组。结论当MOI为100时可作为转染软骨细胞安全有效的条件，这为细胞转染技术在软骨细胞的研究领域提供实验基础。

关键词：细胞转染、原代软骨细胞、慢病毒载体、脂质体、细胞凋亡

分类号：R-322;R361+.2(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金81260419;教育部博士点基金博导类20125215110001

在线出版日期：2015-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：673-676