靶向性发夹状RNA对卵巢癌SKOV3细胞H-ras基因表达的影响

摘要：

目的 运用构建的小发夹状RNA重组质粒pshRNA/H-ras,研究其对卵巢癌SK-OV3细胞株内源H-ras基因的抑制作用.方法 应用基因克隆技术,设计含21bp H-ras基因编码序列片段及中间以4～5个bp间隔的反向重复序列,克隆至转录载体pTZU6+1上并行序列分析.转染重组质粒pshRNA/H-ras至SKOV3细胞中,分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞内H-rasmRNA和蛋白表达的变化.结果 成功构建发夹状RNA载体,经DNA序列鉴定为正确的目的序列.RT-PCR和Western blot结果表明,重组质粒pshRNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2均能在基因转录水平和蛋白表达水平上明显抑制SKOV3细胞内源H-ras蛋白的表达,抑制率达67%以上.结论 重组质粒pshRNA/H-ras可显著抑制SKOV3细胞内源H-ras基因mRNA的转录和相应蛋白质的表达,为进一步研究H-ras基因在卵巢癌细胞异常增殖中的作用打下基础.

关键词：RNA干扰、基因、H-ras、表达、卵巢肿瘤、细胞株、SKOV3

所属期刊栏目：30

分类号：R737.31(肿瘤学)

在线出版日期：2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：584-587