苹果黄酮醇合成酶基因MdFLS1的克隆、生物信息学分析及催化活性鉴定

摘要：

[目的]在'嘎拉'苹果中克隆黄酮醇合成酶基因Md FLS1全长, 对其进行生物信息学分析, 研究其表达特点和催化活性.[方法]利用RT-PCR和PCR克隆Md FLS1的全长, 测序后运用多种生物信息学手段对其序列进行分析, 运用q RT-PCR的方法研究其表达模式, 原核诱导获得Md FLS1蛋白, 并利用高效液相色谱鉴定其催化活性.[结果]苹果Md FLS1基因包含1 014 bp完整的开放阅读框, 编码337个氨基酸, 理论等电点为5.48, 预测分子质量为38.12 ku.苹果Md FLS1基因定位于基因组8号染色体上, 属于α-酮戊二酸依赖性双加酶家族.系统进化树分析表明, FLS在不同物种间具有高度的氨基酸序列保守性;其中, 苹果Md FLS1与甜樱桃Pa FLS亲缘关系最近.苹果Md FLS1蛋白整体表现为亲水性, α-螺旋和不规则卷曲是其最大的结构元件.分析苹果Md FLS1氨基酸序列发现其不含信号肽和转运肽, 没有跨膜结构域, 预测其定位于细胞质中.分析Md FLS1的启动子区域发现含有激素信号、生物和非生物胁迫响应顺式作用元件.Md FLS1在苹果不同组织中都有表达, 在叶中表达量最高, 在茎中表达量较低.原核诱导并纯化了MdFLS1蛋白, 鉴定了Md FLS1的催化活性.[结论]Md FLS1的表达明显受高盐胁迫、低温、干旱和ABA的诱导, 并且具有催化活性.

关键词：苹果、MdFLS1、生物信息分析、表达分析、原核表达

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分类号：S661.1(果树园艺)

资助基金：国家自然科学基金31471854;山东省自然科学基金重大基础研究项目计划ZR2017ZC0328;山东省现代农业产业技术体系创新团队岗位专家SDAIT-06-03

在线出版日期：2018-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：905-916