桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定

摘要：

[目的]为了实现桃铜锌超氧化物岐化酶在大肠杆菌中的高效表达,获得表达稳定、蛋白纯度高、活性强的工程菌,[方法]将前期获得的PpCuZnSOD基因(GenBank登录号:JX217743)重组到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化到Escherichia coli BL21 (DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,镍柱亲和层析纯化,并采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度,黄嘌呤氧化法分析其酶活.[结果]成功的构建了原核表达载体pET-32a(+)-PpCuZnSOD,并获得分子质量约为35 kDa的诱导表达产物,纯化后融合蛋白浓度为183.7 mg·L-1,活性为5.23×103 U· mg-1.[结论]成功构建了桃pET-32a(+)-PpCuZnSOD原核表达载体,表达量高、稳定性强,重组表达产物具有较高CuZnSOD酶活性,为桃CuZnSOD酶的进一步研究奠定了基础.

关键词：桃、PpCuZnSOD、原核表达、纯化、鉴定

所属期刊栏目：30

分类号：S662.1(果树园艺)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金NSFC,30900976;山东省高等学校科技计划J12LF06

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：185-190