双背景法扣除溶剂水峰及蛋白质热变性的研究

摘要：

研究蛋白质水溶液的红外光谱(IR)谱时,由于溶剂水的强吸收与蛋白质的吸收峰会发生严重重叠,极大地干扰对蛋白质吸收峰的识别、定性、定量和结构分析.尝试利用杂化光谱法扣除溶剂水峰.采用双背景方法,用空白ATR晶体(背景样品1)与ATR水层(背景样品2)合成了单光束杂化背景谱,通过控制对背景样品1和背景样品2的扫描次数,合成的单光束杂化背景谱中水的信号强度可任意调节,成功实现了牛血清白蛋白(BS A)水溶液中溶剂峰的在线扣除.与光谱差减技术比较,杂化光谱扣除法具有显著的优势:水3400 cm-1峰强度接近于零,1700～1800 cm-1区间得到近似平滑直线,水1640 cm-1峰彻底扣除,观察到了高质量的酰胺I带吸收峰.将杂化谱法获得BS A红外光谱二次微分,得到蛋白质二级结构大量信息,与文献报道高度吻合.杂化光谱法应用到蛋白质热变性研究中,成功获得没有溶剂水峰干扰的蛋白质红外光谱,变性前后,酰胺Ⅰ带光谱发生明显改变,峰形变化显著,吸收峰往低波数方向移动,吸收强度显著减小.杂化光谱ATR法扣除溶剂水峰简单、易操作、效果令人满意.

关键词：牛血清蛋白水溶液;溶剂水峰;杂化光谱法;双背景

所属期刊栏目：42

分类号：O657.33(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金21773072

在线出版日期：2022-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：642-646