酵母同步细胞的Percoll连续密度梯度改良方法分离及其单细胞拉曼光谱鉴别

摘要：

利用改良后的Percoll连续密度梯度分离方法，分离不同酵母菌株稳定期的同步细胞，并在单细胞水平上，应用激光光镊拉曼光谱对分离的同步细胞进行鉴别。采用高速离心机角式转头和2 mL聚丙烯离心管，20℃，19320 g离心15 min ，将大约1.75 mL Percoll溶液形成1.00～1.31 g · mL －1连续密度梯度；将样品均匀铺加在离心管连续密度梯度液顶层，20℃，400 g离心60 min ，酵母分成明显的2层细胞带；微分干涉差显微镜（DIC ）、相差显微镜以及同步生长曲线分析显示，下层酵母细胞以单个细胞为主，大小均匀、致密，折光性强，生长呈现阶梯式增长，具有同步细胞生长的特性，确定其为同步的G0细胞。利用单细胞光镊拉曼光谱系统对所分离的G0同步细胞与非G0细胞进行分析，结果显示G0同步细胞和非G0细胞的特征峰位置基本一致，但G0细胞对应的蛋白质、糖类、核酸等生物大分子特征峰强度大于非G0细胞，说明G0细胞大分子物质含量要比非G0细胞的高；对G0细胞和非G0细胞进行主成分分析，结果显示，分离的同步化G0细胞之间成分含量差异少，比较均一，而非同步细胞之间内含物质差异大，呈不均一性，说明单细胞光镊拉曼光谱系统可以鉴别同步和非同步细胞。改良后的Percoll连续密度梯度分离方法，能够分离多数酵母菌株同步化细胞，是一种易操作、成本低、效率高的细胞分离方法。

关键词：酵母、Percoll密度梯度离心、同步细胞、拉曼光谱

分类号：O657.3(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金项目31160018;广西科学院基金项目13YJ22WL08

在线出版日期：2015-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2170-2175