心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

摘要：

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础.方法:以质粒人脑cDNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列.将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定.结果: 成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列.结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础.

关键词：转录因子、Nkx2-5、GATA-4、重组质粒、真核表达载体

所属期刊栏目：37

分类号：R329.2+8(人体形态学)

资助基金：江西省科技支撑计划项目20141BBG70069

在线出版日期：2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：42-45