CD4+T淋巴细胞差异表达microRNA在ACS患者的筛选和鉴定

摘要：

目的:通过检测急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血CD4+ T淋巴细胞基因的miRNA,筛选与健康正常人差异表达的miRNA,鉴定对CD4+ T淋巴细胞具有调控作用miRNA,初步阐明miRNA在ACS发病机制中的作用.方法:选取入住我院的确诊为ACS患者20例为ACS组,以疑似ACS而冠脉造影正常的住院患者20例作为正常对照组;首先抽取新鲜外周静脉20 mL,使用密度梯度离心法分离出循环血中的单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),再使用免疫磁珠法(Magnetic cell sorting system,MACS)进一步分离出CD4+ T淋巴细胞;分离的CD4+ T淋巴细胞一部分用于检测纯度,另一部分用于芯片检测.CD4+T淋巴细胞纯度检测采用流式细胞术法(Flow cytometry,FCM)检测,分离所得的CD4+T淋巴细胞纯度,且采用台酚蓝检测活细胞数.CD4+ T淋巴细胞合格后再行下一步实验,即将另一部分CD4+T淋巴细胞采用Trizol法提取其细胞内总RNA后分两部分,一部分提取的RNA采用聚乙二醇(Poly ethylene glycol,PEG)方法分离纯化miRNA,另一部分用于real time PCR备用.用分光光度计测定RNA的浓度,使用凝胶电泳质检RNA的质量,合格后再使用miRNA基因芯片进行杂交,再用Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪检测CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA.另一部分RNA采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)对部分差异表达的miRNA进行验证.结果:使用MACS法分离出高纯度的人CD4+ T淋巴细胞.Trizol法能够提取其细胞内较完好的总RNA.miRNA芯片杂交检测及数据分析结果显示,ACS患者与正常对照者CD4+ T淋巴细胞中,在ACS患者中表达显著上调的有:miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中表达显著下调的有:miR-126和miR-211.实时定量结果显示,与对照组比较,ACS组miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因表达均显著上调,miR-126和miR-221的基因表达均显著下调(P＜0.05),与Affymetrix miRNA基因表达谱芯片检测结果一致.结论:筛选鉴定的ACS患者外周血CD4+T淋巴细胞差异表达的miRNA,可能参与了ACS的发生发展.

关键词：急性冠脉综合征、淋巴细胞、微小核糖核酸、基因芯片、实时定量PCR

所属期刊栏目：35

分类号：R541.4(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：赣州市科技局一般科研项目GZ2014ZSF026

在线出版日期：2015-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：667-672