针对 PKM2多位点 RNAi 质粒载体的构建和筛选

摘要：

目的：构建针对 M2型丙酮酸激酶（ PKM2）基因3个可干扰序列设计小发夹 RNA（small hairpin RNA， shRNA）载体，为下一步探索 Ad-PKM2介导 PKM2 RNAi 对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法：根据 RNAi 设计软件设计并合成3对 shRNA 模板序列，依次将它们克隆至 pGenesil 载体中构建重组质粒，通过 MTT 检测筛选出对乳腺癌细胞株 MCF-7增殖效应影响最强的 RNAi 序列。结果：酶切鉴定和测序结果证实 RNAi 载体构建成功，均能高效感染 MCF-7并抑制 MCF-7细胞的增殖，pGenesil-PKM2-（1+2+3）的抑制能力最强。结论：针对PKM2多靶点 RNAi 载体成功构建，为下一步研究 PKM2被沉默后细胞生物学行为的变化打下基础。

关键词：M2 型丙酮酸激酶、RNA 干扰、小发夹 RNA、乳腺癌

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金项目81160258;江西省教育厅青年基金项目GJJ09584;江西省卫生厅科技项目20092084

在线出版日期：2014-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：325-328,353