靶向调控缝隙连接蛋白43对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

摘要：

目的 探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesen-chymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响.方法 将Cx43目的基因克隆后与慢病毒载体pHBLV-CMVIE-Puro进行连接,重组载体与包装载体共同转染293T细胞后包装生产病毒.获取小鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞表面标志.将慢病毒载体pHBLV-Cx43-Puro(Cx43组)、pHBLV-CMVIE-Puro(空载体组)转染BMSCs,同时设立空白对照组;Western blot和qRT-PCR检测三组细胞中Cx43的表达.成骨诱导培养基诱导三组细胞成骨分化,qRT-PCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2(runt-related transcrip-tion factor 2,Runx2)、锌指结构转录因子(Osterix/Sp7)、转录活化因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、骨唾蛋白(bone sialoprotein,BSP)的表达;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒定量分析三组BMSCs的成骨分化能力.结果 流式细胞术检查示BMSCs中CD29、CD44、CD90呈阳性表达,而CD14和CD34呈阴性表达,pHBLV-Cx43-Puro转染BMSCs后Cx43蛋白和mRNA表达显著增加.成骨诱导后Cx43组成骨相关基因Runx2、Osterix/Sp7、ATF4和BSP的mRNA表达显著高于其他两组(P均＜0.05),ALP活性明显高于其他两组(P＜0.05).结论 Cx43高表达能够显著促进BMSCs向成骨细胞分化,其可能成为骨损伤修复的有效靶点.

关键词：骨髓间充质干细胞、缝隙连接蛋白43、成骨分化、慢病毒

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资助基金：龙华区科技计划医疗卫生项目2030228

在线出版日期：2020-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：149-154