多位点突变提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性

摘要：

为提高大肠杆菌植酸酶AppA(一种已得到广泛应用的饲料添加剂,其酶活高,pH作用范围广,但热稳定性较差)热稳定性,在appA基因上组合突变了W46E、Q62W、A73P、K75C、S146E、R159Y、N204C、Y255D、Q258N和Q349N等10个位点,突变后的基因命名为appAM10.将野生型appAppA和突变体appAM10ppAM10基因转入毕赤酵母GS115进行表达,并对重组蛋白AppA和AppAM10进行了酶学性质研究与比较.结果表明:AppAM 10分子量约为55kDa,比活性为3022U/mg,AppAM10的Km=330μmol/L,Vmax=3147 U/mg.AppAM10的最适pH值为4.5,最适反应温度为65℃.与野生型的AppA的最适pH无明显区别,比AppA的最适温度提高了5℃.经90℃孵育15min后,AppA完全失活,而AppAM10仍残留17.5％的活性,Tm值提高约8℃,说明上述10个位点的组合突变有利于提高大肠杆菌植酸酶AppA热稳定性,其中与N-糖基化有关的N204C、Q258N和Q349N3个位点可能起着重要作用.

关键词：大肠杆菌植酸酶AppA、定点突变、热稳定性、N-糖基化、毕赤酵母

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分类号：R97;R31

资助基金：863计划2012AA020809;国家自然科学基金31372199,31272100

在线出版日期：2015-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1306-1313