CD59活性位点相关性基因突变的构建与表达

摘要：

构建了野生型和突变型CD59重组质粒,建立了高效真核表达系统,探讨了W40位点的生物学活性.采用基因点突变技术使CD59 W40基因位置缺失(突变1,M1)及C39W40K41→W39W40W41(突变2,M2),重叠延伸PCR(overlap extension PCR)定点诱变扩增突变基因,重组入真核表达质粒pIRES,利用阳离子脂质体(Lipfectamine2000) 将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)进行表达.酶切鉴定及序列测定证实成功构建了pIRES-M1CD59、pIRES-M2CD59和pIRES-WTCD59,突变基因约500bp.G418筛选出了CHO转染细胞的稳定细胞克隆,免疫荧光、ELISA检测筛选M1CD59、M2CD59和WTCD59蛋白高表达株,连续传代30代有高表达;补体溶细胞反应显示与野生型CD59相比,突变型M1CD59失去对补体的抑制功能,而M2CD59抗补体活性略增高.证实CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗.

关键词：CD59、基因突变、真核表达、重叠延伸PCR、补体

所属期刊栏目：18

分类号：R97;R37

资助基金：国家自然科学基金30671936

在线出版日期：2008-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：645-649