斑马鱼胚胎中Cre/lox介导的定点整合

摘要：

采用两种类型的lox突变体和双色荧光报告基因,构建了双交换载体pCMVlox66-CreintEGFPlox2272和Plox71RFPlox2272.将Cre酶基因插入载体pCS2+,获得了体外转录模板质粒pCSCre.为检测Cre重组酶对斑马鱼胚胎发育的影响,将体外转录的Cre RNA稀释至不同浓度并分别注射入斑马鱼受精卵.结果显示,当Cre RNA浓度高于200ng/μL时会导致高死亡率和高畸形率;而浓度低于100ng/μL的Cre RNA对胚胎发育不造成影响.进一步将50ng/μL的Cre RNA同双交换载体共注射到斑马鱼受精卵中,筛选到发红色荧光的胚胎.PCR检测和测序鉴定证实,在Cre重组酶作用下,两个载体中lox位点间的荧光基因发生了置换反应.实验结果表明,Cre/lox系统介导的盒式交换反应是实现转基因鱼外源基因定点整合的有效策略.

关键词：Cre重组酶、斑马鱼、定点整合、盒式交换

所属期刊栏目：17

分类号：S9(水产、渔业)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2001CB109006;国家自然科学基金30130050

在线出版日期：2008-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1072-1076