人膜补体调节蛋白MCP、CD59在稳定转染的细胞中的共表达及功能研究

摘要：

采取内核糖体进入位点(IRES)策略构建含人的膜补体调节蛋白基因MCP和CD59的cDNA的双顺反子真核表达载体pcDNA3-MCPIRESCD59,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用 G418筛选阳性克隆,并研究MCP和CD59双基因在稳定细胞系中的共表达及保护功能.PCR实验结果显示双基因稳定整合在异源细胞NIH3T3的染色体上,RT-PCR及Western印迹实验分别从 RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子MCP和CD59在细胞系中皆获得同步表达.检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-MCPIRESCD59,结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系.补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-MCPIRESCD59转染细胞由于MCP和CD59的共表达获得了高于MCP或CD59单一表达时所提供的保护功效,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击.以上结果表明,所构建的双基因重组表达载体实现了不同人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值.

关键词：补体调节蛋白、内核糖体进入位点、共表达、超急性排斥反应

所属期刊栏目：16

分类号：Q5(生物化学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA216071

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1159-1164