表达绿色荧光蛋白基因的花鲈胚胎干细胞株的建立及其体外分化

摘要：

以带有绿色荧光标记的基因(pCMV-EGFP)为报告基因,用Genejammer、Genejuice和Metafectene三种脂质体介导花鲈胚胎干细胞(LJES1)的基因转移.实验发现,Genejammer介导的细胞转化效率最高,高达27.3%,其余分别为12.1%和5.3%.转移绿色荧光蛋白(GFP)基因的LJES1细胞经过药物筛选和单克隆化培养,获得了表达GFP基因的阳性克隆细胞株,经PCR对GFP阳性细胞株的基因组DNA及提取的RNA扩增,获得了目的条带,证实了GFP基因已经整合到LJES1细胞的基因组中,并获得了正常的表达.通过体外诱导,GFP阳性细胞能够分化为神经细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等,用悬滴法培养获得了GFP阳性细胞的拟胚体,证实了经过长期的药物筛选后,LJES1细胞仍然保持着发育的多能性.这一研究,为进一步利用海水鱼类胚胎干细胞进行遗传操作及基因工程的研究提供了方法上的探索.

关键词：脂质体、绿色荧光蛋白、胚胎干细胞、转化、体外分化

所属期刊栏目：16

分类号：Q95(动物学)

资助基金：中国科学院资助项目30170740;国家科技攻关项目2004AA626110

在线出版日期：2006-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：61-66