灭活病毒诱导牙鲆传代细胞差减cDNA文库的构建及分析

摘要：

以灭活大鳞鲆弹状病毒诱导的牙鲆(Paralichthys olivaceus)传代细胞作为检测子(tester),正常对照细胞作为驱赶子(driver),分别提取mRNA,逆转录合成双链cDNA.经两轮差减杂交,两轮抑制性PCR扩增后,取正向差减的PCR产物与T载体连接,构建抑制差减cDNA文库,随机挑取7400余个克隆,对其中4200多个克隆进行PCR扩增鉴定,发现近4000个克隆中均含有插入片段,大小在250～1000bps之间,进一步对含有插入片段的近4000个克隆进行了斑点杂交筛选,得到近668个可能含有抗病毒或与免疫相关的阳性克隆.初步的结果表明所建立的差减cDNA文库适合进一步克隆鱼类抗病毒相关新基因.

关键词：抑制差减杂交(SSH)、差减cDNA文库、牙鲆传代细胞、鱼类抗病毒相关基因

所属期刊栏目：15

分类号：S85;R73

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA626030,2002AA626010;国家自然科学基金30170726;中国科学院科研项目;中国科学院水生生物研究所项目KSCX2-SW-302,220301

在线出版日期：2005-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：79-82