植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定

摘要：

为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,且与Glutathione Sephrose 4B纯化介质的结合率不高.后经优化诱导表达的各种条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,该蛋白具有明显的生物活性.经Glutathione Sephrose 4B亲和层析,所得蛋白纯度>95%.动物实验显示,融合蛋白还具有良好的免疫原性,免疫家兔后可诱导产生高滴度的抗体(>1:10000).ELISA及Western blotting检测进一步证实了所获纯化蛋白及其抗体的特性.这为深入进行HPT蛋白的安全性评价打下了良好的基础.

关键词：hpt、安全性评价、融合表达、包涵体、可溶表达、活性测定

所属期刊栏目：13

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA212041,2001AA212291 2002AA212041;国家重点基础研究发展计划973计划2001CB109001,2001AA2 12041

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：30-36