Smad家族成员2/3/4原核表达载体构建和融合蛋白纯化

摘要：

目的 构建针对Smad家族相关系列原核表达载体,观察其相应蛋白诱导表达纯化情况.方法 PCR扩增Smad2/3/4全长及截短片段,定向插入pGEX-6P-1载体中,构建原核表达重组质粒pGEX-6P-1-Smad2/3/4.经酶切和测序正确后,重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达;上清经GST-Sepharose4B亲和纯化,SDS-PAGE考-马斯亮蓝染色鉴定.结果 原核表达载体pGEX-6P-1-Smad2/3/4构建成功,SDS-PAGE证实Smad3A和Smad4存在包涵体,而上清中GST-Smad3(B-D)和GST-Smad2可被纯化.结论 构建的融合蛋白原核表达载体通过诱导和纯化后得到GST-Smad3截断融合蛋白(B-D)和GST-Smad2.

关键词：Smad家族、克隆、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：35

分类号：R575.5(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金项目81570062、8160009;广东省自然科学基金2016A030313681;广东医科大学科研基金面上培育项目M2015009;2017年度广东省医学科研基金项目A2017010

在线出版日期：2017-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：250-253