慢病毒载体介导的APP695过表达SH-SY5Y细胞系的构建和鉴定

摘要：

目的 通过构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,用以建立可以稳定过表达APP695蛋白的SH-SY5Y-APP695细胞株.方法 利用PCR方法扩增目的基因片段APP695,并构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,鉴定后将构建好的载体与慢病毒包装系统共转染293会细胞,并以最适感染复数感染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,筛选稳转SH-SY5Y-APP695细胞株并用PCR和Westerm blot鉴定稳转株细胞APP695表达.结果 对pLVX-APP695-PGK-Puro载体进行酶切鉴定及DNA测序证明构建过表达APP695的重组慢病毒载体成功,PCR和Western blot显示构建的SH-SY5Y细胞稳转株成功.结论 成功构建APP695基因的慢病毒载体并成功构建了SH-SY5Y-APP695细胞株,该载体可在SH-SY5Y细胞株中高水平表达APP695.

关键词：淀粉样前体蛋白695、慢病毒载体、SH-SY5Y细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R965.2(药理学)

资助基金：国家自然科学基金项目81271214;广东省科技厅博士启动项目S2013040013740;广东医学院心脑相关广东省重点实验室开放基金项目GDKLARCCD201301;广东医学院科研基金博士启动项目S2013040013740;广东中医药局2013建设中医药强省科研课题项目20131257;广东省医学科研基金项目B2013306

在线出版日期：2016-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：435-438