重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

摘要：

目的:表达人磷脂酰肌醇3-激酶 p110 β催化亚基.方法:将构建有人磷脂酰肌醇3 -激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI 3-K)p110 β催化亚基cDNA的重组质粒,转化大肠杆菌BL 21(DE3),用IPTG进行诱导表达.用磷脂酰肌醇-4、5-二磷酸、[γ-32P]ATP与重组PI 3-K p110 β催化亚基一起保温的方法测定PI 3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析.结果:SDS-PAGE显示表达出一110 kD的新蛋白质分子,重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15%,大多数重组蛋白以可溶性形式存在.wortmannin是PI 3-K特异的抑制剂,wortmannin对重组PI 3-K p110 β亚基有抑制作用,这种抑制作用呈剂量依赖关系(2.5～20 nmo1/L).结论:重组蛋白是有活性的人PI 3-K p110 β催化亚基.

关键词：磷脂酰肌醇3-激酶、原核表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q555+.7;Q784;Q786(酶)

资助基金：广东医学院校科研和教改项目XQ 9901;广东省重点学科建设项目9306

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：18-20