RNAi下调MMP-14表达对类风湿关节炎滑膜细胞炎症因子分泌的影响
目的 探究能否通过RNA干扰(RNAi)沉默膜型基质蛋白酶-14(MMP-14)从而抑制类风湿关节炎患者的成纤维滑膜细胞(RA-FLS)炎症因子的分泌.方法 体外化学合成MMP-14序列特异性双链siRNA,与脂质体混合后转染RA-FLS,实验分为3组,MMP-14-siRNA组转染MMP-14特异性siRNA的RA-FLS,Notarget组转染MMP-14非特异性siRNA的RA-FLS,Control组为未经处理的RA-FLS.用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测相关基因转录水平,蛋白质免疫印迹法(western blot)检测MMP-14蛋白水平,Human IL-1β immunoassay检测试剂盒检测细胞炎症因子IL-1β分泌.结果 QRT-PCR结果显示,MMP-14-siRNA组细胞中MMP-14基因表达0.290±0.026,明显比No target组和Control组低(P＜0.001),而No target组细胞的MMP-14基因表达0.984±0.016与Control组比较差异无统计学意义(P＞0.05).RNAi抑制MMP-14基因转录后,MMP-14-siRNA组细胞MMP-14蛋白表达水平明显低于Control组和No target组.QRT-PCR结果显示MMP-14-siRNA组的炎症因子TNF、IL-1β基因转录水平明显降低,分别为Control组的73％和52％,而COX-2的表达差异无统计学意义(P＞0.05).Human IL-1β immunoassay检测试剂盒检测结果进一步验证了MMP-14-siRNA组细胞向胞外释放的IL-1β显著减少,约为Control组的50％,而No target组与Control组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用RNA干扰技术可有效抑制RA-FLS炎症因子分泌,提示RNAi技术沉默MMP-14有可能缓解RA滑膜炎症.
RNA干扰、MMP-14、类风湿关节炎、成纤维滑膜细胞、炎症因子
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R59;R47
2015-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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