低氧诱导因子-1α基因Asn803位点在人骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞中的作用
目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因Asn803位点在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化成心肌细胞中的作用.方法 将重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5- aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周,(1)提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,Western blot测定HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平;(2)更换含有120 μmol/L姜黄素的心肌细胞诱导液培养1 h,后用心肌细胞诱导液继续培养11 h,接着用RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA表达水平的变化.结果 hMSCs 经5-aza 诱导6周后,对照组、Ad-LacZ组、Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组及Ad-HIF-1α564/803组cTnI值分别为0.690±0.019、0.699±0.007、0.736±0.007、0.748±0.008、0.771±0.008及0.814±0.012(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高(P<0.05).Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α及VEGF蛋白均明显升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VEGF蛋白表达水平最高(P<0.05).RT-PCR检测结果显示:经120 μmol/L姜黄素抑制后VEGF mRNA表达水平较未抑制组平均减少了(50.9±4.6)%.然而,在CBP/p300活性受同等抑制条件下,Pro564 Asn803双突变型HIF-1α基因组VEGF mRNA表达水平虽然较未抑制组减少了约40%,但仍显著高于Pro564单突变型HIF-1α基因组(P<0.05).结论 HIF-1α基因Asn803位点在HIF-1α促进hMSCs向心肌细胞分化中起关键作用.
低氧诱导因子1α、Asn803位点、人骨髓间充质干细胞、心肌细胞
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R73;R58
广东省自然科学基金资助项目S2011040004458;广州市科技计划重点项目2012J4100035;广州市医药卫生科技项目20121A011006
2014-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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