柯萨奇病毒A组16型TaqMan一步法荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种快速、灵敏、特异和准确的一步法荧光定量RT-PCR方法 用于检测柯萨奇病毒A组16型(Coxsackieviruses A16,CoxA16).方法 根据GenBank登录的CoxA16基因序列,应用生物学软件进行同源性序列比对后,选出CoxA16高度保守且特异的核苷酸区域polyprotein 基因,设计特异性引物和TaqMan探针;构建重组质粒作为阳性标准品,建立检测CoxA16的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法 的特异性、敏感性、重复性进行评价.结果 成功建立了CoxA16的FQ-PCR检测方法 和定量标准曲线,该方法 最低检测限为101个拷贝/μL,与常规PCR相比,敏感性提高100倍.组内和组间重复性实验的变异系数小于2%.该检测方法 特异性强,与肠道病毒71型、柯萨奇病毒B组5型、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒75型、登革热病毒、霍乱弧菌O1、霍乱弧菌O139、大肠杆菌O157均不发生交叉反应.结论 本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法 灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CoxA16感染的日常检测和实验室早期快速诊断.

关键词：柯萨奇病A组16型、TaqMan探针、一步法荧光定量RT-PCR、检测

所属期刊栏目：33

分类号：R51;R39

资助基金：国家科技重大专项课题资助项目2009ZX10004-106

在线出版日期：2012-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：598-600