转录因子E2F-1过表达抑制胃癌细胞MGC-803的增殖

摘要：

目的 了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,然后经限制性内切酶 EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达的情况.对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布.结果 RT-PCR和Western blotting 实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.MTT法检测发现,与MGC-803/EV细胞组和MGC-803细胞组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61±5.19)% vs(93.4±10.29)%、(100±0.00)%(均P<0.01);细胞周期分析显示MGC-803/E2F-1组的细胞在G0/G1期所占比例为70.70%,高于MGC-803/EV组(59.60%,P<0.01)和MGC-803细胞组(1.40%,P<0.01);MGC-803/E2F-1组的细胞在S期所占比例为17.60%,明显低于MGC-803/EV组的30.70%(P<0.01)和MGC-803细胞组的27.30%(P<0.01).结论 E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期.

关键词：E2F-1、胃癌、MGC-803细胞、细胞增殖、转录因子

所属期刊栏目：31

分类号：R73;R54

资助基金：广东省深圳市科技计划项目200903185

在线出版日期：2010-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2616-2619