Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480

摘要：

目的 构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系.方法 提取正常人体胎盘组织总RNA,PCR扩增人野生型Smad4基因,通过DNA重组技术将该基因片段重组于peDNA3.1(+)真核表达载体上,构建peDNA3.1(+)-Smad4重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定,脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480,G418筛选稳定表达株,RT-PCR 方法检测其mRNA表达水平.结果 Smad4基因的PCR电泳结果显示在1700 bp左右有一明显亮带,连接载体后经鉴定证实为人Smad4-cDNA;稳定转染Smad4基因的SW480细胞RT-PCR结果提示Smad4的mRNA表达水平比对照细胞组明显升高.结论 成功扩增野生型Smad4基因,构建Smad4真核表达质粒,并筛选出Smad4基因稳定表达的SW480结肠癌细胞系.

关键词：Smad4、结肠肿瘤、真核表达质粒、转染

所属期刊栏目：30

分类号：S85;R59

在线出版日期：2009-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：348-350