地贫核酸检测国家参考品对单分子测序试剂的适用性评价

摘要：

目的 评价地中海贫血核酸检测国家参考品(批号:360014-201701)在单分子测序法试剂的适用性.方法 按照α/β-地中海贫血基因分型检测试剂盒行业标准(YY/T 1527-2017)及国家参考品说明书要求,确定适用性研究项目:准确性、特异性及检测限.取拟研究的试剂盒,对国家参考品中的目标区域进行长片段扩增,在目标DNA长片段两端连接接头,使用消化酶去除非环状片段,最终获得哑铃状文库,构建好的哑铃状文库结合测序引物和酶,在基因测序仪Sequel?ⅡCNDx的SMRTCell纳米小孔中进行单分子测序.测序后的基因序列对比到参考基因序列上,通过生物信息软件分析,来判断检测结果与国家参考品的预期结果是否一致.结果 该试剂盒可准确检出范围内相应基因型别的国家阳性参考品,阴性参考品和范围外的国家阳性参考品均未检出突变,且检测限不高于3 ng/μL.结论 地中海贫血核酸检测国家参考品可用于基于单分子测序法的地中海贫血基因检测试剂盒性能评价,此研究扩展了国家参考品的适用范围,并且促进了地中海贫血基因检测试剂盒的标准化.

关键词：地中海贫血、单分子测序技术、国家参考品

所属期刊栏目：14

分类号：R556.61;R737.33;R373.3

资助基金：国家重点研发计划2018YFC1002400

在线出版日期：2022-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1650-1654