成骨不全XV型WNT1基因突变影响成骨细胞分化的机制

摘要：

目的 探讨成骨不全(OI)XV型患者中,WNT1 c.110T>C/p.I37T和c.505G>T/p.G169C错义突变对WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖分化的机制.方法 构建野生型WNT1、WNT1 c.110T>C突变体、WNT1 c.505G>T突变体、WNT1 c.884C>A突变体(阳性对照)和空质粒(载体,阴性对照)转染成骨前细胞(MC3T3-E1).MTS法检测WNT1基因突变对细胞活性的影响,实时定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(WB)分别检测BMP2和RANKL(成骨细胞和破骨细胞分化标志物)的表达.采用qPCR、WB和免疫荧光(IF)检测成骨细胞中WNT1的mRNA、蛋白表达水平与WNT1/β-catenin信号通路相关的蛋白表达水平.结果 转染24 h后,WNT1野生型细胞活性显著高于空载组、c.505G>T及c.884C>A突变组,转染48 h后,c.110T>C和c.505G>T突变细胞活性较WNT1野生型细胞显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).与野生型细胞株相比,c.110T>C和c.505G>T突变株中BMP2基因的表达显著水平降低,RANKL基因的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).WNT1 mRNA在空载组,突变型组和野生型组中的表达量与空载组相比,WNT1在突变型组和野生型组中表达显著上升,差异有统计学意义(P<0.05).与野生型细胞株相比,突变细胞株中非磷酸化β-catenin及磷酸化GSK-3β的表达水平较野生型显著下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 WNT1 c.110T>C和c.505G>T突变可能通过抑制WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖和成骨表型,这可能与OI有关.

关键词：成骨不全、成骨细胞、WNT1、基因突变、β-catenin

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分类号：R735.7;R329.2;R681

资助基金：东莞市社会科技发展资助项目2018507150011653

在线出版日期：2021-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：526-530